< Тесты
Различные типы серологических тестов
Текст обновлен 30-04-2020.
Существует несколько типов серологических тестов для определения наличия специфических антител против вируса SARS-CoV-2 в крови или их эффективности против повторного инфицирования.
Существует три типа серологических тестов, которые различаются по сложности, чувствительности и стоимости:
Быстрый диагностический тест (БДТ): продолжительность 10-30 мин.
Обычно это качественный (положительный или отрицательный) тест бокового потока (иммунохроматографический тест), небольшой и портативный. В этих тестах могут быть использованы образцы крови из пальца, образцы слюны или мазки из носа. ТДР часто похожи на тесты на беременность в том смысле, что тест показывает пользователю цветные линии, указывающие на положительный или отрицательный результат. Для COVID-19 эти тесты чаще всего выявляют антитела пациента (IgG и IgM) или вирусный антиген. Эти тесты не могут количественно определить количество антител, присутствующих в сыворотке крови пациента, и не могут определить, способны ли эти антитела предотвратить инфекцию в будущем.
Иммуноферментный анализ (ИФА): продолжительность от 1 до 5 часов.
Этот тест может быть качественным или количественным и обычно проводится в лаборатории. В этих тестах обычно используются образцы цельной крови или фракции крови пациентов. Тест основан на использовании пластины, покрытой интересующим вирусным белком, например, белком "Спайк" вирусной оболочки. Затем образцы пациента инкубируются с белком, и если у пациента есть антитела к вирусному белку, то они связываются. Связанный с антителами белковый комплекс затем может быть обнаружен другим "антителом", которое производит цветной или флуоресцентный сигнал. В COVID-19 эти тесты чаще всего обнаруживают наличие антител IgG и IgM, вырабатываемых пациентом. Однако эти тесты не могут определить, имеют ли эти антитела нейтрализующее действие, т.е. способны ли они защитить от будущего инфицирования тем же самым вирусом.
Тест на основе реакции нейтрализации: продолжительность 3-5 дней
Этот тест обнаруживает наличие антител, которые могут предотвратить вирусную инфекцию в клетках в лаборатории. Тестирование на основе реакции нейтрализации может показать исследователям, есть ли у пациента активные и эффективные антитела к вирусу, даже если он бессимптомный или уже здоровый. Эти тесты требуют образцов крови пациента. Тесты нейтрализации основаны на культивировании клеток - лабораторном методе, позволяющем вирусу SARS-CoV-2 размножаться в клетках. При культивировании вируса и клеток со снижающимися концентрациями антител пациента, исследователи могут визуализировать и определять дозу антител в крови пациента, которые могут блокировать размножение вируса. Эти тесты могут определить, способны ли антитела защитить от будущей инфекции, но не могут обнаружить присутствие антител к вирусным белкам, которые не участвуют в процессе заражения.
Источники
Литературный обзор Университета Джона Хопкинса по серологическим тестам, разработанным в основном США, Китаем, Южной Кореей, Сингапуром, Германией и Англией.
Кинетика иммунного ответа: Используя иммуноферментный анализ (ИФА), который основан на рекомбинантном вирусном нуклеокапсиде , в исследовании изучался гуморальный ответ носителя на CoV-2-SARS, включая антитела IgA, IgM и IgG. Всего было взято 208 образцов плазмы из 82 подтвержденных и 58 вероятных случаев. Диагностическое значение IgM было оценено в этой когорте. Медианная длительность обнаружения антител IgM и IgA составила 5 дней, а IgG - более 14 дней после проявления симптомов с положительным показателем 85,4%, 92,7% и 77,9% соответственно.
Wu, F., Wang, A., Liu, M., Wang, Q., Chen, J., Xia, S., ... & Jiang, S. (2020). Neutralizing antibody responses to SARS-CoV-2 in a COVID-19 recovered patient cohort and their implications.Одно исследование измеряло кинетику ответов IgM и IgG у 34 пациентов:
Xiao, Gao and Zhang. J Inf 2020. Profile of specific antibodies to SARS-CoV-2: The first report.Иммунологические тесты были также проведены у 16 пациентов в Гонконге с использованием образцов сыворотки, собранных через 14 и более дней после появления симптомов. Сообщалось о следующих показателях серопозитивности: 94% для IgG с анти-N (n=15), 88% для IgM с анти-N (n=14), 100% для IgG с анти-RBD (n=16) и 94% для IgM с анти-RBD (n=15). Уровни IgG анти-SARS-CoV-2-N или анти-SARS-CoV-2-RBD коррелируют с титром вируснейтрализующих антител.
To KK, Tsang OT, Leung WS, Tam AR, Wu TC, Lung DC, Yip CC, Cai JP, Chan JM, Chik TS, Lau DP, Choi CY, Chen LL, Chan WM, Chan KH, Ip JD, Ng AC, Poon RW, Luo CT, Cheng VC, Chan JF, Hung IF, Chen Z, Chen H, Yuen KY. Temporal profiles of viral load in posterior oropharyngeal saliva samples and serum antibody responses during infection by SARS-CoV-2: an observational cohort study. Lancet Infect Dis. 2020 Mar 23. pii: S1473-3099(20)30196-1.Une étude a caractérisé les réponses des anticorps sur une cohorte de 175 patients COVID-19 présentant des symptômes légers. Les personnes âgées et les patients d'âge moyen avaient des titres plasmatiques de NAb et des anticorps fixant significativement plus élevés (P<0,0001 et P=0,0003 respectivement e que ceux des jeunes patients.
Wu, F., Wang, A., Liu, M., Wang, Q., Chen, J., Xia, S., ... & Jiang, S. Neutralizing antibody responses to SARS-CoV-2 in a COVID-19 recovered patient cohort and their implications.Каталан-Дибен прокомментировал исследование, показавшее существование вирус-специфических клеток памяти, распознающих белок S вируса SARS-CoV-2 у инфицированных пациентов.
Catalan-Dibene J. Human antibodies can neutralize SARS-CoV-2. Nat Rev Immunol. 2020 Apr 14.Описание высококачественных серологических тестов Pasteur: Сероконверсия и нейтрализация антител коронавируса произошли через 5-14 дней после появления симптомов, подтверждающих предыдущие исследования.
Грзелак, Л., Теммам, С., Планше, К., Демерет, К., Хьюон, К., Гивель, Ф., ... ван дер Верф, С. (2020). SARS-CoV-2 серологический анализ КОВИД-19 госпитализированных пациентов, лиц с паутинными симптомами и доноров крови. medRxiv, 2020.2004.2021.20068858. doi:10.1101/2020.04.21.20068858.